3.1 Scopo della norma
La UNI EN ISO 11731:2017 specifica il metodo per la rilevazione ed enumerazione di batteri del genere Legionella in matrici idriche mediante coltura. È il metodo di riferimento per la verifica della conformità alle linee guida ISS.
3.2 Flusso operativo
- Prelievo: bottiglie sterili da 1 L (o 100 mL nel punto critico), addizionate con tiosolfato di sodio per neutralizzare il cloro residuo.
- Trasporto: refrigerato a 4-8 °C, recapito al laboratorio entro 24 ore.
- Concentrazione: filtrazione su membrana 0,22 µm di volumi 0,5-1 L per aumentare la sensibilità (soglia 50 UFC/L).
- Decontaminazione: trattamento termico (50 °C per 30 min) e/o acido (HCl-KCl pH 2,2 per 5 min) per eliminare la flora competitiva.
- Semina: piastre di BCYE (Buffered Charcoal Yeast Extract) selettivo con cisteina, ferro pirofosfato e antibiotici.
- Incubazione: 36 ± 1 °C, 2,5% CO₂, 7-10 giorni.
- Identificazione: conferma su BCYE senza cisteina (Legionella non cresce), agglutinazione al lattice per specie/sierogruppo.
3.3 Espressione del risultato
Il risultato è espresso in UFC/L (Unità Formanti Colonie per litro). Il limite di rilevabilità con filtrazione è circa 50 UFC/L.
3.4 Limiti
- Sottostima delle forme VBNC (viable but non-culturable).
- Tempo di risposta lungo (7-10 giorni).
- Per screening rapidi: PCR quantitativa (qPCR), pur con interpretazione cauta perché rileva anche DNA da cellule morte.