La qPCR Legionella spp. quantifica il DNA bersaglio (gene mip o ssrA) in 4-6 ore con LOD <100 GU/L. La coltura ISO 11731 richiede 7-10 giorni ma quantifica solo cellule vitali. La discrepanza fra le due (PCR>>coltura) è comune e indica presenza di cellule non-vitali, VBNC o DNA libero da bonifica recente.
DETTAGLIO TECNICO
Le Linee guida nazionali 2015 considerano la coltura come metodo di riferimento per la sorveglianza ambientale, mentre la qPCR è raccomandata come strumento di screening rapido (esito in giornata), per il monitoraggio post-bonifica e per matrici a forte interferenza colturale (acqua di torri evaporative con biocida). Risultati discordanti vanno interpretati nel contesto del piano di gestione.
PCR VS COLTURA: CRITERI DI INTERPRETAZIONE NELLA GESTIONE DELL'IMPIANTO
La scelta tra qPCR e coltura si presenta al gestore quando servono decisioni in tempi brevi: riaprire un reparto dopo una bonifica, valutare una torre evaporativa durante un cluster, controllare decine di punti in poco tempo. La qPCR offre una risposta in giornata e un esito negativo è un buon indicatore di assenza, mentre un esito positivo va letto con prudenza perché include DNA di cellule morte. Nel piano conviene stabilire in anticipo come usare i due dati, così da non improvvisare davanti a referti discordanti. Dopo l'iperclorazione di un reparto, ad esempio, la qPCR può risultare ancora positiva mentre la coltura su campioni paralleli risulta negativa: in quel caso il gruppo tecnico mantiene il reparto in osservazione e ripete i controlli prima di modificare le misure.
Errori ed equivoci frequenti
- Confrontare direttamente unità genomiche e UFC come se fossero la stessa misura: esprimono grandezze diverse e i valori non sono sovrapponibili.
- Applicare alla qPCR le soglie d'intervento delle Linee guida, che sono riferite ai risultati colturali espressi in UFC/L.
SINONIMI E VARIANTI
- qPCR vs coltura
- molecolare vs colturale Legionella
FAQ: PCR VS COLTURA: CRITERI DI INTERPRETAZIONE
- Perché la PCR è positiva e la coltura negativa per legionella?
- La PCR rileva il DNA del batterio, che resta presente anche dopo che le cellule sono state uccise da una disinfezione, oppure in batteri vivi ma non coltivabili. La coltura conta invece solo le cellule capaci di crescere sulle piastre. La discordanza è quindi frequente, soprattutto dopo una bonifica, e va interpretata insieme alla storia dell'impianto e ai trattamenti recenti.
- Per l'autocontrollo legionella vale la PCR o la coltura?
- Per i controlli ambientali il metodo di riferimento è la coltura, oggi eseguita secondo UNI EN ISO 11731:2017, perché le soglie d'intervento delle Linee guida 2015 sono espresse in UFC/L. La qPCR è utile come screening rapido, per il monitoraggio dopo una bonifica o per controllare molti punti in poco tempo, ma non sostituisce la coltura nei referti ufficiali.
RIFERIMENTI ISTITUZIONALI
- ISO/TS 12869:2019 — Detection and quantification of Legionella spp. and L. pneumophila by concentration and gene amplification
TERMINI CORRELATI
DALLA DEFINIZIONE ALL'INTERVENTO
Sopralluogo, valutazione del rischio, campionamento e referti accreditati ISO 11731 sul tuo impianto.